培(pei)養基(ji)是細(xi)胞培(pei)養中(zhong)*的(de)營養成分，但是基(ji)礎的(de)培(pei)養基(ji)卻(que)給實驗者帶(dai)來(lai)了一系(xi)列的(de)問題。

別小看(kan)細(xi)胞培養，這里(li)可蘊含(han)著大學問。

1.怎樣(yang)查到一個特(te)定細胞株(zhu)的相關知識和(he)培養條件？

ATCC（American Type Culture Collection）收集(ji)了絕(jue)大(da)多數細(xi)(xi)胞(bao)(bao)的(de)詳細(xi)(xi)資(zi)料。打開(kai)ATCC網頁的(de)Cells and hybridomas鏈(lian)接，輸入細(xi)(xi)胞(bao)(bao)名稱就可(ke)以搜(sou)索ATCC的(de)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)數據庫(ku)。數據庫(ku)中有每一種細(xi)(xi)胞(bao)(bao)的(de)詳細(xi)(xi)描述，包括細(xi)(xi)胞(bao)(bao)的(de)來源，培養和凍存條件，以及相(xiang)關文獻等(deng)資(zi)料。

2.如何選用(yong)特殊細胞(bao)系培養基(ji)？

培(pei)養某類型細(xi)胞(bao)沒有固定的(de)(de)培(pei)養條件。MEM中培(pei)養的(de)(de)細(xi)胞(bao)，很(hen)可能在(zai)DMEM或M199中同(tong)樣容易生長。總之，首(shou)-選MEM、DMEM做貼壁(bi)細(xi)胞(bao)培(pei)養；RPMI1640做懸浮(fu)細(xi)胞(bao)培(pei)養；

新(xin)的細胞培養時要詳(xiang)查資料。

3.自己新配制的液體培養(yang)基能保存多久？

我(wo)們建議將新(xin)配制的(de)培(pei)養(yang)基放置于4℃，避光保(bao)存(cun)盡量在一周(zhou)內(nei)使用完畢(bi)，培(pei)養(yang)基越(yue)新(xin)鮮(xian)越(yue)好(hao)。

4.培養基中添加了血清和抗生素后，可長期保存嗎？

一(yi)(yi)旦您在新(xin)鮮培養基(ji)(ji)中(zhong)添加了血清和抗生素時，您應該在一(yi)(yi)到兩周內(nei)使用它(ta)。因為一(yi)(yi)些抗生素和血清中(zhong)的基(ji)(ji)本成分(fen)在解凍后就(jiu)開始降解。

5.培養基中是否須添加抗生(sheng)素？

除了(le)特殊篩選系統外，一般正常(chang)培養(yang)狀態下，培養(yang)基中不應添加(jia)任何抗(kang)生素。

為防止細(xi)菌(jun)、真菌(jun)污染，可以加入青霉(mei)素(su)-鏈霉(mei)素(su)雙抗溶液，其培養基中的(de)終(zhong)濃(nong)度為青霉(mei)素(su)100U/ml，鏈霉(mei)素(su)為100ug/ml，但是不建(jian)議長期使用。

6.液體培(pei)養基可以放-20℃保存嗎？

不可(ke)以！因為在(zai)-20℃下，培養基(ji)中的鹽容(rong)易析(xi)出，培養基(ji)融化后，有的鹽可(ke)能(neng)無(wu)法重(zhong)新(xin)溶(rong)解，從而導致培養基(ji)滲透壓降低，培養細胞時，細胞容(rong)易破(po)裂而死亡。

7.為何培養基保存于4℃冰(bing)箱(xiang)中(zhong)，顏色會偏暗紅(hong)色，且(qie)pH值越來越偏堿(jian)性？

培(pei)(pei)養(yang)基(ji)保存于(yu)4℃冰箱中(zhong)， 培(pei)(pei)養(yang)基(ji)內(nei)之CO2 會(hui)逐漸溢出，造成(cheng)培(pei)(pei)養(yang)基(ji)越(yue)來(lai)越(yue)偏(pian)(pian)堿(jian)(jian)性。而(er)培(pei)(pei)養(yang)基(ji)中(zhong)的酸堿(jian)(jian)指示劑(ji)(通常為(wei)phenol red) 的顏色也(ye)會(hui)隨堿(jian)(jian)性增(zeng)加而(er)更偏(pian)(pian)暗(an)紅。培(pei)(pei)養(yang)基(ji)偏(pian)(pian)堿(jian)(jian)之結果(guo)， 將造成(cheng)細胞(bao)生長停滯或死亡。若培(pei)(pei)養(yang)基(ji)偏(pian)(pian)堿(jian)(jian)時， 可(ke)以通入無菌過濾的CO2， 以調整pH 值。

8.為什么液體(ti)培養(yang)基1640顏色發黃，是(shi)pH值不對嗎？

不是。因為(wei)配方原因，1640為(wei)減酚(fen)紅(hong)型，其中(zhong)酚(fen)紅(hong)的濃度(du)只有(you)DMEM的四分(fen)之一，所以(yi)是因為(wei)酚(fen)紅(hong)濃度(du)低，而(er)非PH值低。

9.培養液pH是(shi)怎樣影響(xiang)細胞生長的？

由于(yu)大(da)多數細(xi)(xi)胞適宜(yi)PH值為7.2-7.4，偏離此范圍對(dui)(dui)細(xi)(xi)胞將產生有害的影(ying)響。各種細(xi)(xi)胞對(dui)(dui)PH值要求(qiu)也(ye)不*相同，原代細(xi)(xi)胞培養(yang)一般對(dui)(dui)PH值變動耐(nai)受差，無限(xian)細(xi)(xi)胞系耐(nai)受力強。

但(dan)總體來說，細(xi)胞耐(nai)酸(suan)性(xing)比耐(nai)堿性(xing)強一些，偏酸(suan)環境中更有利于細(xi)胞的(de)生長。因此，配制培養用液時可(ke)把液體的(de)PH值(zhi)稍微調(diao)的(de)偏酸(suan)一些。液體在經過0.1um或0.2um濾膜過濾時，PH值(zhi)會向(xiang)上浮動(dong)0.2左右(you)。

10.培養液(ye)滲(shen)透壓(ya)是怎樣影響細胞生長的？

當細胞內(nei)、外(wai)環(huan)境(jing)的分子(zi)濃度不同時就會產(chan)生(sheng)滲透(tou)壓。這種情況下，水分通過滲透(tou)流入或流出細胞，從(cong)而改變(bian)細胞的內(nei)環(huan)境(jing)。

高(gao)滲透壓迫使水分從細胞(bao)中擴散出來導致細胞(bao)收縮(suo)，這種(zhong)情況會使DNA和蛋(dan)白遭到破壞，細胞(bao)周(zhou)期停(ting)滯(zhi)以(yi)及終使細胞(bao)死(si)亡；反之，低滲透壓使水分流入細胞(bao)內，使細胞(bao)腫脹破裂。

11.為什(shen)么有(you)客(ke)戶要求培養(yang)基(ji)中不含(han)酚紅？

研究表明，酚(fen)紅可以(yi)模擬固(gu)(gu)醇類(lei)激(ji)素的(de)作用(yong)（特(te)別是雌激(ji)素）。為避(bi)免固(gu)(gu)醇類(lei)反(fan)應，細(xi)胞培養，尤其是哺乳類(lei)細(xi)胞時(shi)，用(yong)不(bu)加酚(fen)紅的(de)培養基。由(you)于酚(fen)紅干擾檢(jian)測，一些研究人(ren)員在做(zuo)流式細(xi)胞檢(jian)測時(shi)，不(bu)使用(yong)加酚(fen)紅的(de)培養基。

12.酚紅的作用是什么？

酚(fen)紅(hong)在培(pei)養基中(zhong)(zhong)被用來作為(wei)PH值指示(shi)劑：中(zhong)(zhong)性時(shi)為(wei)紅(hong)色，酸性時(shi)為(wei)黃色，堿性時(shi)為(wei)紫(zi)色。

13.干(gan)粉培(pei)養(yang)基里含(han)NaHCO3嗎？

所有的干粉培養基中(zhong)都不含NaHCO3 。

請(qing)依據說明書(shu)或包裝袋(dai)上的標注，在(zai)干粉培(pei)養基(ji)*溶(rong)解后添加(jia)NaHCO3 。

14.NaHCO3的作用是什(shen)么？

與CO2一起形成(cheng)緩沖(chong)系統，保持培(pei)養基PH值(zhi)穩定。

15.我們實(shi)驗室(shi)培(pei)養箱(xiang)CO2濃度一直以來都是(shi)5%，這樣可(ke)以嗎(ma)？

當然(ran)不(bu)(bu)(bu)可以，不(bu)(bu)(bu)同的培養基(ji)要求添(tian)加(jia)(jia)(jia)NaHCO3的量不(bu)(bu)(bu)一(yi)樣，如DMEM要求添(tian)加(jia)(jia)(jia)3.7g/L，為了保持PH值穩定，必須用高濃(nong)度的CO2平(ping)衡(heng)，一(yi)般不(bu)(bu)(bu)低于8%，而1640等要求添(tian)加(jia)(jia)(jia)NaHCO3 2.2g/L，還有(you)些培養基(ji)要求添(tian)加(jia)(jia)(jia)更少，那么這些培養基(ji)就要求較(jiao)低的濃(nong)度平(ping)衡(heng)，一(yi)般是(shi)5%。

16.培養基中(zhong)丙-酮酸鈉的(de)作用是什(shen)么？

丙-酮(tong)酸鈉可以作(zuo)為細胞(bao)培養中(zhong)的(de)替代碳源(yuan)，盡管細胞(bao)更(geng)傾向于以葡萄糖作(zuo)為碳源(yuan)，但是如果沒有葡萄糖的(de)話，細胞(bao)也可以代謝丙-酮(tong)酸鈉。

丙-酮酸鈉的貯(zhu)存(cun)(cun)液(ye)濃度一般為50mM，-20℃保(bao)存(cun)(cun)，培養(yang)基中(zhong)的終濃度為1mM.

17.谷氨酰胺的作用是什(shen)么？

幾乎所有(you)的細(xi)胞對谷(gu)氨(an)酰(xian)胺都有(you)較高的要求。谷(gu)氨(an)酰(xian)胺脫掉氨(an)基后，可(ke)作為(wei)培(pei)養細(xi)胞的能量來源，參與蛋白質的合成和能量代(dai)謝(xie)。在缺少(shao)谷(gu)氨(an)酰(xian)胺時(shi)，細(xi)胞生長不良而死亡。所以，各種培(pei)養液中都含有(you)較大量的谷(gu)氨(an)酰(xian)胺。

谷(gu)氨酰胺在溶液(ye)中很不穩定(ding)，應置-20℃冰(bing)凍保存，用前加入(ru)培(pei)養(yang)基(ji)中。加有谷(gu)氨酰胺的(de)液(ye)體培(pei)養(yang)基(ji)4度冰(bing)箱(xiang)儲存兩周(zhou)以(yi)上時，應重新加入(ru)原來量的(de)谷(gu)氨酰胺。

18.在培養基中加入HEPES有何(he)好(hao)處？

培(pei)養基(ji)中-常用的(de)Buffer system是(shi)碳酸(suan)氫鹽，它可提供營養，但卻在生理PH值(zhi)條(tiao)件下會降(jiang)低緩沖能力(li)。而HEPES是(shi)一(yi)種很強的(de)Buffer，加入HEPES能使細胞培(pei)養基(ji)在PH7.2-7.6條(tiao)件下緩沖能力(li)增(zeng)強。

Hepes的(de)貯存液(ye)濃度一般為(wei)1M，常溫保(bao)存。培養(yang)基中的(de)終濃度為(wei)25mM，即5ml 1M的(de)Hepes加入(ru)到200ml*培養(yang)基中。

19.GlutaMAX-Ⅰ是什么？培養細胞如何利(li)用(yong)GlutaMAX-Ⅰ？這個二肽有多穩定？

GlutaMAX-Ⅰ是(shi)一個L-谷氨酰胺(an)的衍(yan)生物，其不(bu)穩(wen)定的a-氨基用L-丙(bing)氨酸來(lai)保護(hu)。一種肽(tai)酶逐漸(jian)裂解二肽(tai)，釋放L-谷氨酰胺(an)供利用。

GlutaMAX-Ⅰ二肽(tai)非常穩定，即使在121℃滅菌20min， GlutaMAX-Ⅰ二肽(tai)溶液有小的降解；而在相(xiang)同條件(jian)下，L-谷氨(an)酰胺幾(ji)乎*降解。

L-谷氨(an)(an)酰胺在細(xi)胞培(pei)養時是重(zhong)要(yao)的(de)，但其(qi)在溶(rong)液中不穩定，經過一段時間后會降解(jie)，確切的(de)降解(jie)率一直沒有(you)終確定。L-谷氨(an)(an)酰胺的(de)降解(jie)導致(zhi)氨(an)(an)的(de)形(xing)成，而氨(an)(an)對于一些(xie)細(xi)胞具有(you)毒(du)性。因此GlutaMAX-Ⅰ是細(xi)胞培(pei)養中谷氨(an)(an)酰胺的(de)替代品。

20.可否(fou)使用與原先(xian)培養(yang)條(tiao)件不同的培養(yang)基？

不能。每一細胞(bao)株(zhu)均有其特定使用(yong)且已適(shi)應之(zhi)細胞(bao)培(pei)養(yang)基，若驟然(ran)使用(yong)和原先提供(gong)之(zhi)培(pei)養(yang)條件不同的(de)培(pei)養(yang)基，細胞(bao)大多無法立即(ji)適(shi)應，造成細胞(bao)無法存活(huo)。