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細胞難伺候,你真的會選培養基嗎?

更新時間:2022-03-25      點擊次數:1163
  培(pei)養基(ji)的配制
  培(pei)養基可(ke)按處方配制,也可(ke)使用按處方生產的(de)(de)符合規定的(de)(de)脫(tuo)水培(pei)養基。
  在(zai)制備培(pei)(pei)養(yang)基(ji)(ji)時,應(ying)選擇質量(liang)符(fu)合要求的(de)脫(tuo)水(shui)培(pei)(pei)養(yang)基(ji)(ji)或單獨(du)配方組分(fen)進行配制。脫(tuo)水(shui)培(pei)(pei)養(yang)基(ji)(ji)應(ying)附(fu)有(you)處方和(he)使(shi)(shi)用(yong)(yong)說明(ming),配制時應(ying)按使(shi)(shi)用(yong)(yong)說明(ming)上的(de)要求操作(zuo)以確保(bao)培(pei)(pei)養(yang)基(ji)(ji)的(de)質量(liang)符(fu)合要求,不(bu)得使(shi)(shi)用(yong)(yong)結塊或顏(yan)色發生(sheng)改變(bian)的(de)脫(tuo)水(shui)培(pei)(pei)養(yang)基(ji)(ji)。脫(tuo)水(shui)培(pei)(pei)養(yang)基(ji)(ji)或單獨(du)配方組分(fen)應(ying)在(zai)適(shi)當的(de)條(tiao)件下儲(chu)存(cun),如低溫、干燥(zao)和(he)避光,所有(you)的(de)容(rong)器應(ying)密封,尤其是盛放脫(tuo)水(shui)培(pei)(pei)養(yang)基(ji)(ji)的(de)容(rong)器。商品(pin)化的(de)成品(pin)培(pei)(pei)養(yang)基(ji)(ji)除了應(ying)附(fu)有(you)處方和(he)使(shi)(shi)用(yong)(yong)說明(ming)外,還(huan)應(ying)注明(ming)有(you)效期、貯存(cun)條(tiao)件、適(shi)用(yong)(yong)性檢查試驗的(de)質控(kong)菌和(he)用(yong)(yong)途(tu)。
  為保證(zheng)培(pei)(pei)養基(ji)(ji)質量(liang)(liang)的穩(wen)定可靠,各脫(tuo)水(shui)培(pei)(pei)養基(ji)(ji)或各配方組分應準確(que)稱量(liang)(liang),并要求有(you)一(yi)定的精確(que)度。配制培(pei)(pei)養基(ji)(ji)常用的溶劑是純化水,特殊情況下,可能需要用去離子水和蒸餾水。應記錄各稱量物的重量和水的使用量。配制培養基所用容器和配套器具應潔凈,可用純化水沖洗玻璃器皿以消除清潔劑和外來物質的殘留。對熱敏感的培養基如糖發酵培養基其分裝容器一般應預先進行滅菌,以保證培養基的無菌性。
  脫水型培(pei)(pei)養基應(ying)*溶解于水中,再行分裝與滅菌。配(pei)制時(shi)若需要加(jia)熱(re)助溶,應(ying)注意不要過(guo)度加(jia)熱(re),以避(bi)免(mian)培(pei)(pei)養基顏色變(bian)深。如需要添(tian)加(jia)其(qi)它(ta)組(zu)分時(shi),加(jia)入后應(ying)充分混勻。
  應按(an)照生產商(shang)提供或(huo)使用(yong)者驗證的(de)參數進行培(pei)(pei)(pei)養基(ji)的(de)滅(mie)菌。商(shang)品化的(de)成品培(pei)(pei)(pei)養基(ji)必須(xu)附有所用(yong)滅(mie)菌方(fang)法的(de)資料。培(pei)(pei)(pei)養基(ji)滅(mie)菌一般采用(yong)濕熱滅(mie)菌技(ji)術,特殊培(pei)(pei)(pei)養基(ji)可采用(yong)薄膜過濾除(chu)菌。
  培(pei)養基(ji)若采用(yong)不適當的(de)(de)(de)加熱和滅(mie)(mie)菌(jun)(jun)條(tiao)件(jian),有(you)可(ke)能引起顏色變化(hua)、透明度降低(di)、瓊(qiong)脂(zhi)凝固(gu)力或pH的(de)(de)(de)改變。因此(ci),培(pei)養基(ji)應采用(yong)驗(yan)(yan)證(zheng)的(de)(de)(de)滅(mie)(mie)菌(jun)(jun)程序(xu)滅(mie)(mie)菌(jun)(jun),培(pei)養基(ji)滅(mie)(mie)菌(jun)(jun)方(fang)法和條(tiao)件(jian),應通過無菌(jun)(jun)性(xing)試驗(yan)(yan)和促(cu)生(sheng)長試驗(yan)(yan)進(jin)行(xing)驗(yan)(yan)證(zheng)。此(ci)外,對高(gao)壓滅(mie)(mie)菌(jun)(jun)器的(de)(de)(de)蒸汽循環系統(tong)也要(yao)加以驗(yan)(yan)證(zheng),以保(bao)證(zheng)在一定裝載(zai)(zai)方(fang)式下的(de)(de)(de)正常熱分布。溫度緩(huan)慢上升的(de)(de)(de)高(gao)壓滅(mie)(mie)菌(jun)(jun)器可(ke)能導致培(pei)養基(ji)的(de)(de)(de)過熱,過度滅(mie)(mie)菌(jun)(jun)可(ke)能會(hui)破(po)壞絕大多數的(de)(de)(de)細菌(jun)(jun)和真菌(jun)(jun)培(pei)養基(ji)促(cu)生(sheng)長的(de)(de)(de)質量。滅(mie)(mie)菌(jun)(jun)器中(zhong)培(pei)養基(ji)的(de)(de)(de)容(rong)積(ji)和裝載(zai)(zai)方(fang)式也將影響(xiang)加熱的(de)(de)(de)速(su)度。因此(ci),應根據(ju)滅(mie)(mie)菌(jun)(jun)培(pei)養基(ji)的(de)(de)(de)特性(xing),進(jin)行(xing)全面(mian)的(de)(de)(de)滅(mie)(mie)菌(jun)(jun)程序(xu)驗(yan)(yan)證(zheng)。,
  應確定每批培(pei)養(yang)(yang)基滅(mie)菌后的(de)pH(冷卻至室溫25℃測定)。若培(pei)養(yang)(yang)基處方(fang)中(zhong)列出pH的(de)范圍(wei),除非經驗證表明(ming)培(pei)養(yang)(yang)基的(de)pH允許(xu)的(de)變化(hua)范圍(wei)很寬,否則,pH的(de)范圍(wei)不能超過規定的(de)±0.2。
  制成(cheng)(cheng)平板或(huo)分(fen)裝(zhuang)于試管的(de)培養基(ji)應(ying)進行下列(lie)檢查(cha):容器和(he)蓋子(zi)不(bu)(bu)得(de)破裂(lie)(lie),裝(zhuang)量應(ying)相(xiang)同(tong),盡量避免形成(cheng)(cheng)氣泡,固體培養基(ji)表面不(bu)(bu)得(de)產生裂(lie)(lie)縫或(huo)漣漪(yi),在冷藏溫度下不(bu)(bu)得(de)形成(cheng)(cheng)結晶,不(bu)(bu)得(de)污染微生物(wu)等。應(ying)檢查(cha)和(he)記錄批數(shu)量、有效期及培養基(ji)的(de)無菌檢查(cha)。
  培養基(ji)的貯存
  自配的培養(yang)基(ji)應(ying)標(biao)記名(ming)稱、批號(hao)、配制日期等信息,并在已驗證的條件(jian)下貯藏。商品(pin)化(hua)的成(cheng)品(pin)培養(yang)基(ji)標(biao)簽上應(ying)標(biao)有名(ming)稱、批號(hao)、生產(chan)日期、失效(xiao)期及(ji)培養(yang)基(ji)的有關特(te)性,生產(chan)商和使(shi)用者應(ying)根據培養(yang)基(ji)使(shi)用說(shuo)明(ming)書上的要求進行保存,所采(cai)用的保藏和運輸條件(jian)應(ying)使(shi)成(cheng)品(pin)培養(yang)基(ji)低(di)限度的失去水分并提供機械保護。
  培(pei)養(yang)(yang)基(ji)滅(mie)菌后(hou)若儲(chu)藏(zang)在高壓(ya)滅(mie)菌器中,質量可能會受影響,一般(ban)不提倡這種存(cun)放(fang)法。瓊脂(zhi)培(pei)養(yang)(yang)基(ji)不得在0℃或0℃以(yi)下(xia)存(cun)放(fang),因為冷凍可能破壞凝膠特性。
  培養基(ji)應(ying)(ying)避光保存(cun),若(ruo)要(yao)長期保存(cun),應(ying)(ying)置于密閉容器中以(yi)防止水分流(liu)失。瓊脂平(ping)板最好(hao)現配(pei)現用,如(ru)置冰箱保存(cun),一般不超過(guo)一周(zhou),且(qie)應(ying)(ying)密閉包裝,若(ruo)延長保存(cun),保存(cun)期需經驗(yan)證(zheng)確(que)定。
  固體培(pei)養(yang)(yang)基(ji)滅(mie)菌(jun)后的(de)(de)再融化只(zhi)允許一(yi)次,以避免(mian)因(yin)過度受熱造成(cheng)培(pei)養(yang)(yang)基(ji)質量下降或微(wei)生物污染。培(pei)養(yang)(yang)基(ji)的(de)(de)再融化一(yi)般(ban)采用的(de)(de)水(shui)(shui)(shui)浴加熱或流通蒸(zheng)汽。若使用微(wei)波爐,應(ying)避免(mian)培(pei)養(yang)(yang)基(ji)過度受熱及水(shui)(shui)(shui)分的(de)(de)蒸(zheng)發,更要注意安全。融化的(de)(de)培(pei)養(yang)(yang)基(ji)應(ying)置(zhi)于45~50℃的(de)(de)水(shui)(shui)(shui)浴中,不得超過8小時。傾(qing)注培(pei)養(yang)(yang)基(ji)時,應(ying)擦(ca)干培(pei)養(yang)(yang)基(ji)容(rong)器外表面的(de)(de)水(shui)(shui)(shui)分,避免(mian)容(rong)器外壁的(de)(de)水(shui)(shui)(shui)滴進入培(pei)養(yang)(yang)基(ji)中造成(cheng)污染。
  使用(yong)過的培養基(ji)(包括失效(xiao)的培養基(ji))應按照國家污(wu)染(ran)廢物處理(li)相關規定進行處理(li)。
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